Southern Blotting

直接比较三种带正电尼龙膜在各自优化实验方案下的表现：每种膜在其推荐的紫外波长照射下交联。

Immobilon-Ny+ 转印膜的杂交信号是其它两种膜的 2 倍。

12 次重复杂交之后的信号强度

尼龙膜在 254 nm 交联，并进行了多次重复杂交，依次为：用 ³²P 标记探针做 2 次杂交，4 次模拟杂交，

用 ³²P 标记探针做第 7 次杂交，然后进行 5 次模拟杂交以及用 ³²P 标记探针做第 13 次杂交。 在每个杂交周期之间，

将膜置于 0.4M NaOH 溶液中，在 45°C 下洗提 30 分钟。 模拟杂交与真实杂交完全一样，区别在于未加 ³²P 标记探针。

在整个重复杂交过程中， Immobilon-Ny+ 的信号强度是竞争产品 A 和 B 的两倍。

检测灵敏度

将凝胶上 DNA 的量减少到 0.01 ng。 0.1 lane(条带)中的 2.2 和 2.0 kbp 带分别与 DNA 的 0.48 和

0.42 pg 相对应。 大约相当于 10 μg 人类基因组 DNA 中一个单拷贝基因序列。 可通过对探针浓度

加倍来提高灵敏度。 在 0.01 ng 条带中，与竞争产品 A 相比，Immobilon-Ny+ 转印膜灵敏度稍高，而背景信号更低。

用化学发光检测进行 Northern Blotting

鼠肝的全部 RNA (1 μg) 在甲醛琼脂糖凝胶中电泳分离，然后通过毛细作用转印到 Immobilon-Ny+ 转印膜和

竞争产品带正电尼龙膜 “A”。 与烘焙相比，通过紫外交联固定RNA 能增强信号。 Immobilon-Ny+ 转印膜比

竞争产品 A 表现出更高的灵敏度。

Colony Lifts

将载有 pUC19 或 pLH2(2.0 kbp λ 噬菌体 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19)的 JM109 混合细菌悬浮液

置于琼脂培养皿中，在 37°C 下培养过夜。 将培养皿在 4°C 下冷却30 分钟，将菌落(直径大约 1–2 mm)转

印至一片 82 mm 直径的 Immobilon-Ny+ 圆片膜上，或转印至竞争产品带正电的尼龙膜上。 膜上的 DNA 在254 nm，

60,000 μJoules/cm² 紫外光照射下 交联。 然后用 a ³²P 标记的 DNA 探针对膜进行杂交，并使用磷屏成像系统显色。